瑞氏染色法(wright'sstain;美蓝－伊红y）：用瑞氏染色液对细菌进行染色以便进行显微镜检查的染色法。

1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（methvlemblue）和酸性染料黄色伊红（eostmy）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红y）染料。

伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。

2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：

（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（m）与伊红（e）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。

甲醇

me（瑞氏染料）————→m++e-

在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

3.瑞氏染液配制：

(1)瑞氏染液配制：

瑞氏染料830gm或1g

甲醇（ar）500ml或600ml

先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。

(2)缓冲液：

1)缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察ph值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。缓冲液须保持一定的ph使染色稳定，pbs的ph一般在6.4~6.8，偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使ph恒定。

2)缓冲液配制（ph6.4~6.8，弱酸性）：

配方1：配方2：

1%kh2po430mlm/15kh2po473.5ml
1%na2hpo420mlm/15na2hpo426.5ml
h2o(新鲜)加至1000ml
置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。



简易步骤介绍：

1、取病料涂片、自然干燥

2、滴加瑞氏染液染1分钟,使标本被其中甲醛所固定;

3、加等量ph6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动玻片,均匀静置5分钟;

4、水洗、吸干、镜检。