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培养基

编辑:chaxungu时间:2022-09-28 05:46:44分类:生物百科

培养基(medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。
按所用原料不同,可分为两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基,大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在2~6。c的冰箱内。

常见培养基有:
1、细菌培养基

配方一牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏0.3克,蛋白胨1.0克,氯化钠0.5克,琼脂1.5克,
水100毫升

在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整ph值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二马铃薯培养基

取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液ph值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。

配方三根瘤菌培养基

葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克
碳酸钙3克硫酸镁0.2克
酵母粉0.4克琼脂20克
水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升

先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。

2、放线菌培养基

配方一淀粉琼脂培养基(高氏培养基)

可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克
磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克
硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克
琼脂2克水100毫升
先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整ph值到7.2~7.4,分装后灭菌,备用。

配方二面粉琼脂培养基

面粉60克琼脂20克
水1000毫升
把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟。另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整ph值到7.4,分装,灭菌,备用。

3、真菌培养基

配方一萨市(sabouraud’s)培养基

蛋白胨10克琼脂20克
麦芽糖40克水1000毫升

先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。

本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。

配方二马铃薯糖琼脂培养基

把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分。在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。

把这培养基的ph值调到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。

配方三黄豆芽汁培养基

黄豆芽100克琼脂15克
葡萄糖20克水1000毫升

洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟。用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用。

把这培养基的ph值调到7.2~7.4,可用来培养细菌和放线菌。

配方四豌豆琼脂培养基

豌豆80粒琼脂5克
水200毫升

取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用。

4、食用菌菌种培养基

配方一马铃薯—蔗糖--琼脂培养基

20%马铃薯煮汁1000毫升
蔗糖20克琼脂18克

把马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。使用该培养基对ph值要求不严格,可以不测定。

配方二综合马铃薯培养基

20%马铃薯煮汁1000毫升

磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克
葡萄糖20克维生素10毫克
琼脂18克

先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整ph值到6。分装,灭菌,备用。该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。

5.烟草的培养基
在植物组织培养时,通过调节iaa和ctk的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.ctk/iaa高时,愈伤组织分化芽
ctk/iaa低时,分化根;ctk/iaa比例适中维持愈伤组织不分化

愈伤组织诱导培养基制备
以ms培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100ml,微量元素100×母液20ml,铁盐100×母液20ml,维生素100×母液20ml,肌醇200×母液10ml,甘氨酸200×母液10ml,配制得ms培养基后,再加入0.5mg·l-1的ba8ml,0.5mg·l-1的naa8ml.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·l-1的naoh和0.5mol·l-1的hcl调整ph值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2l,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.

烟草叶片愈伤组织诱导
取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解
剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种
5小片,一共接种6瓶.接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同
样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观
察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率.

器官分化及植株再生培养
将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22c条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况.

愈伤组织诱导的总体情况
烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而
未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发
生污染,但诱导率几乎各不相同.其中,在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为
60.0╣,在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,外植
体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整
个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小.

培养基还有:1640培养基

特殊培养基:

一选择性培养基
1酵母菌富集培养基
葡萄糖5%尿素0.1%硫化铵0.1%磷酸二氢钾0.25%磷酸氢二钠0.05%七水合硫酸镁0.1%七水合硫酸铁0.01%酵母膏0.05%
孟加拉红0.003%ph4.5
2ashby无氮培养基富集好养自生固氮菌
甘露醇1%磷酸二氢钾0.02%七水合硫酸镁0.02%氯化钠0.02%
二水合硫酸钙0.01%碳酸钙0.5%

二鉴别培养基
emb培养基,常用于鉴别e.coli
蛋白胨10g乳糖5g蔗糖5g磷酸氢二钾2g伊红y0.4g美蓝0.065g
蒸馏水1000gph7.2

分离海洋微生物的培养基配方

2216e培养基配方(固体培养基)
蛋白胨5克
酵母膏1克
磷酸高铁0.01克
琼脂15-----20克
陈海水1000毫升
煮沸氢氧化纳(5%)的溶液调ph值7.6—7.8

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