[生物——选修3现代生物科技专题]

2006年12月26日，国内首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农大降生，具体培育过程如下图所示，请据图回答问题。

(1)从图中可以分析出，该克隆猪的培育过程涉及的现代生物技术除了基因工程和胚胎工程外，还有___________ 。

(2)B过程中，将绿色荧光蛋白基因导入成纤维细胞最有效的方法是___________。在导入之前，需要先将目的基因与载体结合以构建___________ ，这一过程需要的主要工具包括___________ 。为了检测目的基因是否成功插入受体细胞的染色体DNA上，需要采用___________技术进行分子检测。

(3)得到早期胚胎后，可通过___________技术以获得更多的转基因克隆猪。为了给早期胚胎移入受体提供相同的生理环境，在H过程之前需要对代孕母猪进行___________处理。早期胚胎能够在代孕母猪体内存活的生理学基础是___________。

(4)培育绿色荧光蛋白转基因克隆猪的遗传学原理是___________。

(5)图中决定克隆猪性别的生物个体是___________。

(6)在治疗人类疾病时，转基因克隆动物的细胞、组织和器官可以作为异种移植的供体，此外，随着组织工程技术的发展，通过___________细胞体外诱导分化，也可培育出人造组织器官，从而解决目前临床上存在的供体器官不足的问题。这种细胞是由___________中分离出来的。

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解析:

考查的是基因工程的原理及技术、基因工程的应用、动物的细胞培养与体细胞克隆、胚胎干细胞的移植。

(1)从图中可以分析出，该克隆猪的培育过程涉及的现代生物技术除了基因工程和胚胎工程外，还有动物体细胞核移植。

（2）目的基因导入动物受体细胞中最有效的方法是显微注射法。在导入之前，需要先将目的基因与载体结合以构建基因表达载体，这一过程需要的主要工具包括限制酶、 DNA连接酶、载体。为了检测目的基因是否成功插入受体细胞的染色体DNA上，需要采用DNA分子杂交技术进行分子检测。

(3)得到早期胚胎后，可通过胚胎分割技术以获得更多的转基因克隆猪。为了给早期胚胎移入受体提供相同的生理环境，在H过程之前需要对代孕母猪进行同期发情处理处理。早期胚胎能够在代孕母猪体内存活的生理学基础是受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应。

(4)基因工程的原理为基因重组，因此培育绿色荧光蛋白转基因克隆猪的遗传学原理是基因重组。

(5)由于图中克隆猪的核遗传物质来自于猪胚胎，因此决定克隆猪性别的生物个体是猪胚胎。

(6)随着组织工程技术的发展，通过胚胎干细胞体外诱导分化，也可培育出人造组织器官，从而解决目前临床上存在的供体器官不足的问题。这种细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的。