降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用游离的脱氧核苷酸和Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图。在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。请据图回答：

（1）Klenow酶是一种___________酶，合成的双链DNA有________个碱基对。

（2）获得的双链DNA经EcoRⅠ（识别序列和切割位点-G^↓AATTC-）和BamHⅠ（识别序列和切割位点-G^↓GATCC-）双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。

①设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是保证 和 的定向连接。

②要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含有_______________基因。

（3）经DNA测序表明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是合成的核苷酸单链仍较长，产生 现象。

（4）上述制备该新型降钙素，运用的现代生物工程技术是____________________。

在线课程

（1） DNA聚合酶 126

（2）①目的基因 载体（质粒） ②标记

（3）缺失碱基 （4）蛋白质工程

解析:

此题考查基因工程和蛋白质工程，合成双链DNA需要DNA的聚合酶，有同一种限制酶切割，目的是使目的基因和质粒载体形成相同的黏性末端。