根据所提供材料，回答问题。

“烟草有害健康”，人人皆知。那么，能否通过实验，进一步了解烟草对微生物基因突变的影响？已知：粘质沙雷氏菌在正常情况下生长，是红色菌落；当外界因素引发粘质沙雷氏菌发生突变时，菌落将呈现白色。某校学生小组设想：若用不同浓度的烟草浸出液处理粘质沙雷氏菌，会发生什么？

供选材料及器具：粘质沙雷氏菌液，烟草浸出液母液；NaCl，蛋白胨，琼脂，4mol /L NaOH 溶液；培养皿，锥形瓶，量筒，1毫升移液管，烧杯，酒精灯，接种环，pH试纸等。

请补充、完善以下方案：

提出假设：

（1）假设 。

实验设计：

步骤一：制备培养基

（2）完成步骤一必须选用的材料是 。（至少写出2种）

步骤二：制备烟草浸出液的稀释液

（3）烟草浸出液的稀释液制备方法与要求

。

步骤三：接种、培养

（4）用不同浓度的烟草浸出液培养粘质沙雷氏菌；用接种环蘸取菌液以 法接种在培养基上。接种时，需要将灼烧后的接种环冷却后再取菌种，原因是 。

（5）在整个实验过程中，为保证无杂菌污染，除培养基灭菌外，还需要将 、

等灭菌。

步骤四：观察并记录数据：

分析讨论

（6）将可能的实验结果在下面的方框中用直角坐标图直观地表示出来（实验数据用相对值表示即可，标明纵横坐标含义）：

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（1）烟草浸出液浓度越大，菌落的红色越少 / 白色菌落数越多

（2）蛋白胨； 琼脂 （或NaCl、等）

（3）用移液管移取烟草浸出液母液进行稀释；

浸出液的稀释液应有一定浓度梯度，梯度一致；

有一定数量，至少3~5个等

（4）划线（或点接） 冷却可保证接种为活菌种

（5）接种环境灭菌 接种过程灭菌 稀释液灭菌等

（写出其中两项即可）

（6）曲线图（2分）（趋势、横纵坐标标识正确）

（曲线趋势应与假设对应）