（10分）生物技术实践

材料：饲料原料中的磷元素有相当一部分存在于植酸中，猪、禽等动物由于缺乏有关酶，无法有效利用植酸，造成磷源浪费，而且植酸随粪便排除后易造成环境有机磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成为目前重要的饲料添加剂之一。

（1）商品化植酸酶主要来自微生物。在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生 ，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性。活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间 表示。

（2）利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图：

Ⅰ中的主要成分为 ；Ⅱ中包含多种酸酶等多种蛋白质。请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据。

（3）为建设基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包含多次循环，每次循环包括三步：____ 。反应过程中打开模板DNA双链的方法是 。

（4）除植酸酶外，微生物还应用在 的生产中。

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（1）透明圈 植酸钠的消耗量（肌醇和磷酸的生成量）

（2）小分子杂质

凝胶色谱法：根据蛋白质之间分子大小，吸附性质等差异进行纯化。（或电泳法：根据蛋白质之间电荷，分子大小等差异进行纯化。）

（3）变性，复性，和延伸 加热

（4）蛋白酶，脂肪酶，纤维素酶

解析:

本题考查对微生物的分离和培养，蛋白质的纯化，酶活性鉴定等知识，结合实际应用。