右图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用运载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达。请回答：

(1)一个基因表达载体的组成除目的基因外，还必须有 、 和标记基因等。将基因表达载体导入细菌B之前，一般要先用 处理细胞，以增加其细胞壁的通透性。

(2)将得到的细菌涂抹在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的，反之则没有。以上培养基按用途属于 培养基。

(3)上述培养基上聚集的菌种可通过 法或 培养成单菌落，经进一步筛选即可获得导入重组质粒的工程菌。获得纯培养物的关键是无菌操作，其中对培养皿进行灭菌常用的方法是 。

(4)在获得目的基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应需要在一定的缓冲溶液中加入DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种 、四种脱氧核苷酸和 的 DNA聚合酶。

在线课程

（1）启动子 终止子 Ca²⁺

（2）选择

（3）平板划线 稀释涂布平板 干热灭菌法

（4）引物 耐高温

解析:

（1）基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子、标记基因，将基因表达载体导入细菌B之前，一般要先用Ca²⁺处理细胞；（2）含有氨苄青霉素的培养基能培养导入质粒A或重组质粒的细菌，而其他的则不能生长，说明属于选择培养基；（3）将培养基上聚集的菌种培养成单菌落的方法是平板划线法或稀释涂布平板法，对培养皿进行灭菌常用的方法是干热灭菌法；（4）PCR扩增反应需要在一定的缓冲溶液中加入DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种引物、四种脱氧核苷酸和耐高温的 DNA聚合酶。