下面是利用大肠杆菌生产人胰岛素的有关问题，请回答：

（1）利用大肠杆菌生产人胰岛素必须应用____________和___________等工程学手段。

（2）为了获得人的胰岛素基因通常采用________________________________的方法，

（3）大肠杆菌质粒经EcoRI（一种限制性核酸内切酶）切割后所形成的黏性末端之一是

，则EcoRI的识别序列和切点是___________（切点用箭头标在序列上）。

（4）要将人的胰岛素基因插入上述质粒切口形成重组质粒必须利用的工具酶是__ _。

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（1）基因工程 发酵工程

（2）人工合成基因（或根据人胰岛素的氨基酸序列，人工合成胰岛素基因）

（3）—G^↓GATCC— （4）EcoRI和DNA连接酶

解析:

（1）利用大肠杆菌生产人胰岛素必须首先在大肠杆菌内导入人的胰岛素基因（基因工程），然后将转基因大肠杆菌进行大量培养（发酵工程）

（2）人的胰岛素基因是真核生物的基因，在实践中常用人工合成的方法（或根据人胰岛素的氨基酸序列，人工合成胰岛素基因）合成。

（3）EcoRI（一种限制性核酸内切酶）识别序列和切点是—G^↓GATCC—

（4）在转基因工程构建重组基因时，除了用限制酶来提取目的基因外，还用同一种限制性内切酶（EcoRI——切割质粒，暴露出相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接。