下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有　 　 个游离的磷酸基团。

（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　 　 。

（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是　 　 。

（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止　 　　　　　　　　　　 。

（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　 　 酶。

（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　 　　　　　。

（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能

力的大肠杆菌突变体，然后在　 　 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

（8）用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb 即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。

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(1) 2 (2)高 (3) SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因

(4) 质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 (5)NDA连接

(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞(7)蔗糖为唯一含碳营养物质