产人胰岛素的方法”的专利摘要：本发明利用转基因番茄为生物反应器生产人胰岛素。所用的人胰岛素基因是依据植物“偏爱”的密码子来设计所含的密码子，通过人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在胰岛素-COOH端加上KDEL内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解。将该基因置于CaMV35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下，通过农杆菌介导的方法转入番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素。请回答：

（1）本专利是采用___________方法获得目的基因的。获得的人胰岛素基因与人体细胞中胰岛素基因的碱基序列不同，但两者所编码的蛋白质中氨基酸序列相同，原因是__________ 。要想在体外获得大量该目的基因的片段，可以采用___________。该技术中使用的关键酶是___________________ ；还需____________________等条件。

（2）根据上述摘要，转基因操作时所用的载体是____________，载体上的____________

可以转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。

构建的基因表达载体中应含有____________（多选）

①目的基因 ②CaMV 35S启动子 ③果实专一性启动子2A12 ④引物

⑤标记基因 ⑥内含子滞留序列 ⑦终止密码子 ⑧终止子

（3）如果要检测在受体细胞中是否存在目的基因可采用____________ ，该技术中使用的基因探针也可以用来检测_____________________ 。此外，还可以从_______对目的基因的表达进行鉴定。

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（1）人工合成 密码子具有简并性（不同的密码子对应同一种氨基酸）

PCR技术 热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶） 四种游离的脱氧核苷酸和引物

（2）农杆菌的Ti质粒 T–DNA ①②③⑤⑧

（3）DNA分子杂交技术 目的基因是否转录出mRNA 个体水平