回答下列有关基因工程和酶工程的有关问题（9分）

下图所示为利用现代生物技术获得能表达某蛋白酶工程菌的过程。

选用质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答：

59．构建含目的基因的重组质粒A时，应选用限制酶 　　　　，对　 　　　进行切割。再用　　　　　 进行重组。

60．图中质粒同时用PstⅠ和ApaⅠ酶切，产生1800对碱基和8200对碱基的两种片段，如用以上四种酶同时切割此质粒，则产生600对碱基和8200对的碱基两种片段，那么用同时用PstⅠ和EcoRⅠ酶切，则产生的片段有　　 　　　　 。

61．筛选后所得到的工程菌增值后表达出大量此蛋白酶，但此蛋白酶不会分泌到细胞外，因此还需要利用酶工程中的　　　　　 技术获得此蛋白酶，

62．获得此蛋白酶后，利用酶的固定化技术能回收和重复利用此蛋白酶，以下属于固定化技术中的载体结合法的是（　 ）

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59. PstI、EcoRI(2分) 质粒和含目的基因的DNA（2分） DNA连接酶

60. 1200对碱基和8800对碱基（2分）

61. 分离提纯

62. C