科学家在水稻基因组中发现了一种特殊的营养基因,为了对其进行扩增,有人设计了两种不同的扩增方法。一种是将该DNA片段用限制酶切割下来,导入细菌细胞中,然后通过培养细菌进行体内扩增;另外一种方法是利用PCR技术进行体外扩增。
(1)方法1的过程如下:
第一步:用限制酶将目的基因切割下来,插入到含有特异性抗生素标记基因的质粒中。
第二步:将重组质粒导入受体菌,利用添加特异性抗生素的培养基对受体菌进行筛选。
第三步:对筛选得到的受体菌进行培养、扩增。
第四步:从培养得到的受体菌中分离纯化目标DNA片段。
①筛选的标准是看在该培养基上受体菌________,其原理是________________________
________________________________________________________________________。
②请举出一种影响培养效果的因素,并简要说明其原理:____________________________________________________________________________。
(2)根据方法2回答下列问题:
①PCR技术的关键是要能制备得到耐高温的________酶,该酶的功能是__________________________________。
②PCR中加入的引物有______种,加入引物的作用是____________________________。
③PCR技术的原理是_____________________________________________。
在线课程(1)①能否生长 只有含有重组质粒的细菌(即含有目的基因的细菌)才含有特异性抗性基因,才能在添加特异性抗生素的培养基上生长
②培养温度,温度影响细菌体内酶的活性(或培养的气体条件,氧气和二氧化碳的含量会影响细菌的代谢)(2)①DNA聚合 催化脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键②2 作为DNA复制的起点(3)DNA双链复制