“基因靶向”技术,指的是应用DNA同源重组原理,通过一定的载体,用设计好的目的基因替代靶基因,从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术,科学家可以用小鼠进行实验,使其体内的某项特定基因丧失功能,以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程,请回答有关问题:
(1)获得胚胎干细胞(ES细胞)。实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞,这是因为ES细胞具有发育的________。请举出一例获取ES细胞的常用方法: ____________________________________。
(2)获取目的基因。
①目的基因是靶基因的同源片段。经过修饰使靶基因的功能改变或丧失,就可获得目的基因。如果要获得活性降低了的X酶蛋白的目的基因,可以根据此蛋白的结构及功能进行X酶基因的改造,这一技术叫做________。
②为了提高实验成功率,需要通过________技术扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝。
(3)构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成,除了目的——基因以外,还必须有________基因,以便于细胞的筛选。质粒具有的一至多个________位点,使目的基因插人其中成为可能,因此常被选作运载体。
(4)____________________,并从中筛选,然后培育出小鼠。
①由ES细胞培育出小鼠的过程中,需要采用________技术和________技术。
②为了确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组,可通过观察小鼠的性状来检测,这属于________水平的鉴定。
在线课程(1)全能性 从早期胚胎(囊胚内细胞团)中分离、从胎儿的原始性腺中分离、通过核移植技术培育得到(任答一例) (2)①蛋白工程 ②PCR (3)标记 限制酶切割 (4)将基因表达载体导入ES细胞 ①早期胚胎培养 胚胎移植 ②个体生物学