哺乳动物成熟的红细胞中含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要就是由血红蛋白完成的。我们选用猪、牛、羊等动物的血液来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:
(1)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。此过程即是样品处理,它应包括红细胞洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液。
①其中加入柠檬酸钠的目的是___________________。
②洗涤红细胞的目的是__________________ ___。洗涤后的红细胞多数要置于 中,可以使细胞 。
(2)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析,这就是样品的粗分离。
①透析的目的是____________________________________________。
②透析的原理是_______________________________________________。
(3)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电脉进行纯度鉴定。其中通过凝胶色谱法将样品纯化的目的是___________________________。
在线课程(1)①防止血液凝固 ②去除杂蛋白 蒸馏水 吸水胀破
(2)去除相对分子质量较小的杂质 透析袋能使小分子自由进出,而大分子蛋白质则保留在袋内
(3)通过凝胶色谱法去除相对分子质量较大的杂质
(1)柠檬酸钠是一种抗凝剂,加入柠檬酸钠可以防止血液凝固;洗涤红细胞的目的是去除血液中的杂蛋白,以利于后续步骤的分离纯化。(2)透析袋一般是用硝酸纤维素制成的,透析袋能使小分子自由进出,而将大分子保留在袋内,透析可以去除样品中分子量较小的杂质或用于更换样品的缓冲液。(3)凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法,因此通过凝胶色谱法去除相对分子质量较大的杂质。