基因工程中，外源DNA片段常用PCR方法扩增，扩增后需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。下表列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）含目的基因的外源DNA片段用PCR方法扩增时使用DNA聚合酶，其不同于一般生

物体内DNA聚合酶的最主要特点是　 ▲　 。PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图1为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？　 ▲　 。

（2）图2中的质粒和含目的基因的外源DNA构建重组质粒，一般不只用AluⅠ一种酶切割，原因是　 ▲　 。

（3）图2中获取的重组质粒时运用了　 ▲　 限制酶切割，切割后的质粒与目的基因片段混合，加入了　 ▲　 酶，该酶是对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？　 ▲　 。

（4）重组质粒导入受体细胞后，通常要进行检测。若要检测目的基因是否转录出mRNA，可用　 ▲　 技术；若要检测目的基因是否表达出蛋白质，可用　 ▲　 技术。

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（1）耐高温 引物对B

（2）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身会连接环化

（3）AluⅠ和BamHⅠ DNA连接酶　 否

（4）分子杂交（DNA-RNA分子杂交） 　抗原—抗体杂交