红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步;________、________、________和________。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。
①加入柠檬酸钠的目的是____________________________________。
②在样品处理中包括红细胞的洗涤、____________、分离血红蛋白溶液、透析。
③洗涤红细胞的目的是____________,你如何知道红细胞已洗涤干净? ______________________。
④分离红细胞时对离心速度和离心时间的要求是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
⑤若离心速度过高和时间过长,结果会怎样?________________________________________________________________________
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(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析,这就是样品的粗分离。
①透析的目的是__________________________________________________________
________________________________________________________________________。
②透析的原理是_________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
①样品纯化的目的是______________________________________________________
________________________________________________________________________。
②血红蛋白有什么特点?_________________________________________________
________________________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义?________________________________________________________________________
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在线课程(1)样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定 (2)①防止血液凝固 ②血红蛋白的释放 ③去除杂蛋白 离心后的上清液没有黄色 ④低速短时间离心,如500 r/min离心2 min ⑤离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度 (3)①去除相对分子量较小的杂质 ②透析袋能使小分子自由进出,而大分子则保留在袋内 (4)①通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去 ②血红蛋白呈现红色 在凝胶色谱分离时可通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液,这使血红蛋白的分离过程非常直观,大大简化了实验操作
分离提取血红蛋白的实验流程大致是:样品处理—粗分离—纯化—纯度鉴定四个步骤。柠檬酸钠属于抗凝剂。血红蛋白是红色含铁的蛋白质。凝胶色谱法分离蛋白质是依据蛋白质的相对分子质量大小来进行的。