科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstI、SmaI、HindⅢ、AluI等四种限制酶切割位点。下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）基因工程的核心步骤是___________，在该步骤中，可用一种或多种限制 酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶___________，分别对________________进行切割，切割后产生的DNA片段分别为______种和________种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体I中含有________，作为标记基因。除上述目的基因和标记基因外，基因表达载体I中还应有___________、___________和复制原点。

（3）研究人员通常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

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（1）构建基因表达载体 PstI、SmaI 含鱼抗冻蛋白基因的DNA和质粒

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（2）抗氨苄青霉素基因(ampr) 启动子 终止子

(3)农杆菌转化(或基因枪法等，答案合理即给分) 抗原--抗体杂交