科学家通过探究DNA载体途径的RNA干扰技术抑制端粒酶的活性,从而抑制肿瘤细胞生长增殖,以寻找一种抑制肿瘤增长的新途径。
方法思路:
①构建干扰质粒________{插入针对人体端粒酶逆转录酶亚基(hTERT)的mRNA的干扰序列}和对照质粒PSG-CTR(插入不针对人体任何DNA序列的对照组序列)。
②用空质粒PSG(不含目的基因)、干扰质粒PSG-AS和对照质粒分别感染肝癌细胞。
③一段时间后观察检测细胞的________。计算细胞凋亡率,绘制肝癌细胞生长曲线。结果如下图:


请回答下列问题。
(1)完成方法思路中的空格:
①________;③_____________________________________________________。
(2)在构建质粒时,要将质粒导入大肠杆菌细胞并用________培养基进行筛选鉴定,然后再提取。因此,在构建的表达载体质粒上必须含有________。
(3)端粒酶可以通过以自身的________为模板,________为原料来合成端粒DNA。
(4)分析DNA载体途径的RNA干扰技术能否抑制肿瘤细胞的增殖?
在线课程(1)题干中指出干扰质粒是PSG-AS。题图中有端粒酶活性细胞凋亡率、细胞数(生长情况),因此,端粒酶活性、细胞凋亡情况、细胞生长情况是检测指标。(2)标记基因用于筛选鉴定含有质粒的大肠杆菌,用选择培养基进行筛选鉴定。(3)端粒酶是逆转录酶,以自身RNA为模板,以脱氧核苷酸为原料,合成端粒DNA。(4)从题图看出,PSG-AS组端粒酶活性低,细胞凋亡率高,细胞数增长缓慢,能较好地抑制肿瘤细胞。
答案:(1)①PSG-AS ③端粒酶活性、细胞凋亡情况、细胞生长情况
(2)选择 标记基因
(3)RNA 4种脱氧核苷酸
(4)从结果可知PSG-AS导入肝癌细胞发挥作用后,端粒酶活性降低,细胞凋亡率升高,细胞生长受抑制,说明通过DNA载体途径的RNA干扰技术抑制端粒酶活性的方法,能较好地抑制肿瘤细胞的增殖。