生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油(如下图)。

(1)用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用____________、__________方法从油料作物中提取。

(2)筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中的添加的植物油为微生物生长提供____________，培养基灭菌采用的最适方法是____________________法。

(3)测定培养液中微生物数量，可选用______________法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测______，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用____________技术使脂肪酶能够重复使用。

(4)若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的____________技术。

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(1)压榨　萃取(两空无先后顺序)

(2)碳源　高压蒸汽灭菌

(3)显微镜直接计数　酶活性(或：酶活力)　固定化酶(或：固定化细胞)

(4)PCR(或：多聚链式反应，聚合酶链式反应)