降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图所示。在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：

（1）上述制备该新型降钙素，运用的现代生物工程技术是________________。

（2）Klenow酶是一种________________ 酶，合成的双链DNA有_______________个碱基对。

（3）获得的双链DNA经EcoRⅠ（识别序列和切割位点-G^↓AATTC-）和BamHⅠ（识别序列和切割位点-G^↓GATCC-）双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。

①设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是________________ 。

②双酶切后DNA插入到大肠杆菌质粒中能得到________________ 种重组质粒。

③要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含有________________ 。

（4）经DNA测序表明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是________________ 。

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（1）蛋白质工程

（2）DNA聚合酶 126

（3）①保证目的基因和载体定向连接（或防止目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接

②2　

③标记基因

（4）合成的核苷酸单链仍较长，产生缺失碱基的现象