23．图9中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图甲、图乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。下列叙述正确的是 ( )

A．用质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma I切割

B．图甲所示的质粒分子在经Sma I酶切割后含有4个游离的磷酸基团

　C．为获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA聚合酶

D．用EcoR I、HindⅢ和BamH I中的任意一种酶切割质粒和外源基因都可以

在线课程

【答案】A

【解析】 质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团。从图1可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团；质粒和目的基因连接后获得重组质粒，该过程需要连接酶作用，故混合后加入DNA连接酶。 只使用EcoR I，则质粒和目的基因两端的粘性末端相同，用连接酶连接时，会产生质粒和目的基因自身连接物，而利用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ剪切时，质粒和目的基因两端的粘性末端不同，用DNA连接酶连接时，不会产生自身连接产物。