35.（7分）棉铃虫是一种危害棉花的害虫。我国科学工作者发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金杆菌能分泌一种毒蛋白使棉铃虫致死，而这种毒蛋白对人畜无害。通过基因工程方法，科学家采用花粉管通道法将毒蛋白基因转入棉花植株并成功表达，棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡。花粉管通道法是指：利用植物花粉萌发时形成的花粉管通道将毒蛋白基因送入胚囊，进而导入尚不具备细胞壁的合子或早期胚细胞，最终形成含有目的基因的种胚。此种方法的优点是操作简便，省去了组培的复杂过程。

（1）利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞，此过程是基因操作的基本步骤中的第三步，即 。构建基因表达载体时要把目的基因整合到Ti质粒的T-DNA上，其原因是 。

（2）基因工程的工具酶可以将目的基因切下并连接到运载体上。限制酶可以识别特定的DNA序列，并切断 键。下列所示的黏性末端是由 种限制酶作用产生的。

（3）用标记的特异性抗体可以直接检测毒蛋白，这种检测方法称为 。

也可在宏观性状水平检测该目的基因是否表达，方法是 。已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞 。

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【答案】

35.（7分）

（1）将重组DNA导入受体细胞 Ti质粒能将目的基因整合到棉花染色体上

（2）磷酸二酯键 4

（3）抗原-抗体杂交 让害虫吃棉花，观察害虫的生存状态 表面无特异性受体

【解析】利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞，相当于基因工程操作步骤中的第三步——“将目的基因导入受体细胞”。据图分析限制性核酸内切酶的识别序列为GAATT 、CAATT、GTTAA、CTTAA这4种，而酶具有专一性，故需4种不同的限制性核酸内切酶。目的基因的检测与鉴定相关方法为：通过分子杂交技术检测转基因生物的DNA是否插入了目的基因及目的基因是否转录出mRNA。