37．（8分）大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的运载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中，如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出口一半乳糖苷酶。当培养基中含有IPTG和X-gal时，X-gal便会被β一半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。

请分析并回答：

（1）已获得的目的基因可利用 技术进行扩增。

（2）目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中，需要DNA连接酶恢复 键。

（3）将试管I中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ的目的是 ；大肠杆菌需事先用Ca²⁺进行处理，目的是 。

（4）将试管Ⅱ中的菌液接种于选择培养基上培养，培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质包括 和生长因子，还应加入IPTG、X-gal以及氨苄青霉素，其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出 。

（5）若观察到培养基上出现 色菌落，则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因，则不利于重组质粒的筛选，原因是 。

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【答案】

37.（8分）

（1）PCR

(2) 磷酸二酯

（3）进行转化 使大肠杆菌细胞处于感受态

（4）碳源、氮源、无机盐、水 导入pUC18质粒的大肠杆菌

（5）白 无论大肠杆菌是否导入重组质粒，均会呈现蓝色菌落

【解析】本题考查基因工程的知识。已获得的目的基因可利用PCR技术进行扩增；培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质包括碳源、氮源、无机盐、水和生长因子，还应加入IPTG、X-gal以及氨苄青霉素，其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出导入pUC18质粒的大肠杆菌。

①如果长出蓝色菌落，说明重组的运载体pUC18质粒已转入受体菌，但目的基因没有接入运载体（或说明重组质粒没导入受体大肠杆菌）

②如果长出白色菌落，说明重组质粒已导入受体大肠杆菌