40．（15分）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（１）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有　 　　和　 　　。

（２）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：

为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是　 　　。

（３）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即　　　　　DNA连接酶和　　　　　　　DNA连接酶。

（４）反转录作用的模板是　 　　，产物是　　 　。若要在体外获得大量反转录产物，常采用　　 　技术。

（５）基因工程中除质粒外，　　　　　和　　　　　　也可作为运载体。

（６）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是　　　　 　　　。

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【答案】（１）平末端和粘性末端 （２）切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同 （３）Ｔ_４　　Ｅcoli （４）mRNA 单链ＤＮＡ　　　ＰＣＲ（聚合酶链式反应） （５）动植物病毒　　λ噬菌体的衍生物 （６）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱

【解析】本题着重考查基因工程方面的知识。限制性核酸内切酶可以将DNA分子切成两种类型的末端，平末端和黏性末端。两种不同酶切割之后便于相连，所产生的黏性末端必须相同。ＥcoliDNA连接酶可以连接黏性末端，Ｔ_４DNA连接酶可以连接两种末端，反转录是以mRNA为模板逆转录先合成单链DNA，再合成双链DNA，利用ＰＣＲ技术进行大量扩增。基因工程中可以选用质粒，噬菌体、动植物病毒做载体。当受体细胞是细菌时，为了增大导入的成功率，常用Ca+处理，得到感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒。