从土壤中分离自生固氮菌制成临时涂片的步骤是（）
A.观察→培养→接种→涂片B.接种→观察→培养→涂片C.培养→接种→观察→涂片D.接种→培养→观察→涂片在线课程D
解析：自生固氮菌的分离方法步骤是：第一步接种，第二步将接过种的培养皿放在恒温箱内培养，第三步是取出培养皿观察，第四步是制作临时装片镜检。