下列对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作不正确的是( )
A.加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐B.让吸管管口沿管壁环绕移动,贴壁加样至色谱柱顶端,不要破坏凝胶面C.打开下端出口,待样品完全进入凝胶层后直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱D.待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,每5mL收集一管,连续收集流出液在线课程C
试题分析:加样前,打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐,再关闭出口;用吸管管口沿管壁环绕移动,贴壁加样至色谱柱顶端,不要破坏凝胶面;打开下端出口,使样品渗入凝胶床内,等样品完全进入凝胶层后,关闭下端出口,加入磷酸缓冲液到适当的高度,然后连接缓冲液洗脱瓶,打开下端出口,进行洗脱;待红色的蛋白质接近色谱柱底端时,每5mL收集一管,连续收集流出液。故选C
考点:本题考查蛋白质的分离过程。
点评:本题难度中等,只需熟记蛋白质分离和提取过程中样品的加入和洗脱过程即可。
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