如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5，下列操作方法正确的是

A.操作前要将接种环放在火焰旁灭菌B.划线操作须在火焰上进行C.在5区域中才可以得到所需菌落D.在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌在线课程D
试题分析：在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法是在火焰上灼烧，故A错误、D正确；接种时，划线操作是在火焰旁进行，以免杂菌污染，故B错误；在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落，故C错误。
考点：本题考查平板划线的操作过程，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点的能力。