A.b、c分别表示用限制酶和DNA聚合酶的处理B.切割目的基因与切割运载体（如质粒）时需用同种限制酶C.切割目的基因或运载体时一般只用一种限制酶D.构建的基因表达载体只要求含有目的基因在线课程B
本题考查的是基因工程的有关内容。由图可知，b、c分别表示用限制酶和DNA连接酶的处理，A错；切割目的基因与切割运载体（如质粒）时需用同种限制酶，以形成相同的黏性末端，B正确；切割目的基因或运载体时为了防止其出现首位相连的情况，应用多种限制酶切割，C错；构建的基因表达载体，除含有目的基因，还应含有启动子、终止子、标记基因等，D错。故本题选B。