刚果红染色时，加入刚果红可在
①制备培养基时
②梯度稀释时
③倒平板时
④涂布时
⑤培养基上长出菌落时
A.①③B.②⑤C.③⑤D.④⑤在线课程C
解析：
常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。，所以C选项正确。