有关平板划线操作正确的是(　　)

A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞

C．培养皿盖打开后将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五平行线即可

D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养

D　【解析】实验中在每次使用的接种环、培养皿在使用后均要灭菌，操作过程是在无菌条件下进行的；打开的菌种管口通过火焰以防止杂菌进入试管造成污染，但并不是将试管进行灭菌；平板划线应在五个区域内进行重复，并不是只划一次。