2．(2012·天津理综)黄曲霉毒素B₁(AFB₁)存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起癌变。某些微生物能表达AFB₁解毒酶，将该酶添加在饮料中可以降解AFB₁，清除其毒性。回答下列问题：

(1)AFB₁属于________类致癌因子。

(2)AFB₁能结合在DNA的G上，使该位点受损伤变为G^*，在DNA复制中，G^*会与A配对。现有受损伤部位的序列为，经两次复制后，该序列突变为________。

(3)下图为采用基因工程技术生产AFB₁解毒酶的流程图。

据图回答问题：

①在甲、乙条件下培养含AFB₁解毒酶基因的菌株，经测定，甲菌液细胞密度小、细胞含解毒酶；乙菌液细胞密度大、细胞不含解毒酶。过程Ⅰ应选择________菌液的细胞提取总RNA，理由是_____________________________________________________________。

②过程Ⅱ中，与引物结合的模板是____________________________________________________________。

③检测酵母工程菌是否合成了AFB₁解毒酶，应采用________方法。

(4)选取不含AFB₁的饲料和某种实验动物为材料，探究该AFB₁解毒酶在饲料中的解毒效果。实验设计及测定结果见下表。

组别	添加		肝脏AFB1残留量(ng/g)
	AFB1 (μg/kg饲料)	AFB1解毒酶(g/kg饲料)
A	0	0	6.4
B	100	0	20.9
C	100	1	16.8
D	100	3	11.7
E	100	5	7.3
F	100	7	7.3

据表回答问题：

①本实验的两个自变量分别为_____________________________。

②本实验中，反映AFB₁解毒酶解毒效果的对照组是________。

③经测定，某污染饲料中AFB₁含量为100 μg/kg，则每千克饲料应添加________克AFB₁解毒酶，解毒效果最好，同时节约了成本。

(5)采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的________序列。

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答案：(1)化学 (2)—ATT—,—TAA—) (3)①甲　甲菌液细胞的AFB₁解毒酶基因已转录生成mRNA，而在乙菌液细胞中该基因未转录　②AFB₁解毒酶基因的cDNA　③抗原—抗体杂交 (4)①AFB₁的添加量和AFB₁解毒酶的添加量　②B组(或B组＋A组)　③5 (5)脱氧核苷酸

解析：本题考查考生对DNA的复制、基因工程相关知识的掌握情况，重点考查考生的实验设计及实验分析能力，难度较大。(1)黄曲霉毒素属于化学致癌因子。(2)分析题意：AFB₁能使DNA中的G突变为G^*，G^*与A配对，受损伤部位序列为—AG^*T—，其互补链为—TAA—，即双链DNA的—AG*T—,—T C A—)突变后序列变为—ATT—,—TAA—)，复制两次后仍为—ATT—,—TAA—)。(3)分析采用基因工程技术生产AFB₁解毒酶的流程图，可知获取目的基因的方法为反转录法，因此从细胞中提取的总RNA中，必须含有AFB₁解毒酶基因转录形成的mRNA，因此选择甲菌液获取RNA；乙菌液细胞中虽然含有AFB₁解毒酶基因，但细胞不含解毒酶，可能是该基因未发生转录；PCR扩增的目的基因即AFB₁解毒酶基因的cDNA；从分子水平上检测工程菌是否合成了AFB₁解毒酶，应采用抗原—抗体杂交技术。(4)根据对照实验设计的原则分析：A组与B组比较，自变量为AFB₁的添加量；B组与F组比较，自变量为AFB₁解毒酶的添加量，反映解毒酶效果的对照组应为B组(或A＋B组)。分析数据得出：E组、F组解毒效果最好，为了节约成本，每千克饲料添加5 g AFB₁解毒酶最适宜。(5)蛋白质工程是从蛋白质的功能出发，推测应有的氨基酸序列，然后找到相应的脱氧核苷酸序列，最后通过基因修饰或基因合成达到目的。